液相色譜儀常見的10種故障原因及解決方法
2021-02-16 09:23:21來源：admin
高效液相色譜儀(HPLC) 是一種具有高靈敏度、高選擇性的高效快速分離分析技術(shù)。它既能用于微量組分的分析測(cè)定，又能用于大量的制備分離，其應(yīng)用范圍已超過其它各種分離方法。高效液相色譜儀作為一種高精密儀器，在使用過程中會(huì)遇見很多問題，今天譜析色譜小編聊聊常見故障原因及解決方法。
故障1：壓力波動(dòng)大，流量不穩(wěn)定
原因分析：
系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使兩者不能密封。
解決方法：
工作中注意觀察流動(dòng)相的量，保證不銹鋼濾器沉入儲(chǔ)液器瓶底，避免吸入空氣，流動(dòng)相要充分脫氣。若單向閥和閥座之間夾有異物，拆下單向閥，放入盛有丙酮的燒杯中用超聲波清洗。
故障2：自檢時(shí)，出現(xiàn)“燈能量低”的錯(cuò)誤
原因分析：
一般來說是由于系統(tǒng)中有擋光物，光路偏離，氘燈電源系統(tǒng)或氘燈燈泡已壞。
解決方法：
首先要檢查光度室是否有擋光物；打開檢測(cè)器光源室蓋，檢查氘燈是否點(diǎn)亮，如果氘燈不亮，則關(guān)機(jī)，更換新氘燈，換氘燈時(shí)，需注意型號(hào)；檢查氘燈保險(xiǎn)絲，看是否松動(dòng)、氧化、燒斷，如果氘燈保險(xiǎn)絲出現(xiàn)故障，應(yīng)立即更換；再開機(jī)重新自檢，若仍出現(xiàn)上述故障，則重新安裝軟件后再進(jìn)行自檢。
故障3：出峰不準(zhǔn)，峰分叉
原因分析：
造成這種情況的原因一般是色譜柱被污染，或柱頭填料塌陷。
解決方法：
對(duì)于第1種情況，先用純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時(shí)間的長短由樣品污染的情況而定)，再換成甲醇沖洗，然后，再用純水沖洗，最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30min以上。
對(duì)于第2種情況，擰開柱頭，檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷，去除硬結(jié)部分(污染的填料)，裝入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填平，用與內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊，再填平，滴甲醇，再壓緊反復(fù)幾次，直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈，擦凈柱外壁的填料，擰緊柱頭，用純甲醇沖洗30min以上。
故障4：柱壓升高
原因分析：
造成柱壓升高的原因一般是由于緩沖液鹽份如乙酸銨等，沉積柱內(nèi)，或樣品污染沉積，造成流體阻力加大所致。
解決方法：
對(duì)于第1種情況先用40～50℃的純水，低速正向沖洗柱子，待柱壓逐漸下降后，相應(yīng)的提高流速?zèng)_洗，柱壓大幅度下降后，用常溫純水沖洗，之后用純甲醇沖洗柱子30min。
對(duì)于第2種情況，由樣品的沉積引起污染的C18柱，和純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時(shí)間的長短由樣品污染的情況而定)，再換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，最后用甲醇正向沖洗柱子30min以上。
故障5：峰面積重復(fù)性不佳
原因分析：
主要原因有進(jìn)樣閥漏液；加樣針不到位或液量不足。
解決方法：
對(duì)于第1種情況更換進(jìn)樣墊圈；對(duì)于第2種情況保證加樣針插到底，注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉(zhuǎn)換到INJECT狀態(tài)，以保證進(jìn)樣量的準(zhǔn)確。
故障6：流動(dòng)相內(nèi)有氣泡
原因分析：
流動(dòng)相內(nèi)不斷有氣泡溢出，關(guān)閉泵，打開排空閥，按PURGE鍵清洗脫氣，氣泡不斷的從過濾器冒出，進(jìn)入流動(dòng)相，無論打開PURGE鍵幾次，都無法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。主要是因?yàn)檫^濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi)，過濾器內(nèi)部由于霉菌的生長繁殖，形成菌團(tuán)，阻塞了過濾器，緩沖液難以流暢地通過過濾器，空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進(jìn)入流動(dòng)相。
解決方法：
過濾器浸泡于5%硝酸溶液中，超聲清洗15min即可；亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12～36h，輕輕震蕩幾次，再將過濾器用純水清洗幾次，打開泄壓閥，打開PURGE鍵清洗脫氣，如仍有氣泡不斷從過濾器冒出，繼續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中，如沒有氣泡從過濾器中冒出，說明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團(tuán)已被硝酸破壞，流動(dòng)相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥，打開泵，流速調(diào)至1.0～3.0mL/min，純水沖洗過濾器1h左右。即可將過濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥，純甲醇沖洗0.5h即可。
故障7：基線漂移
原因分析：
一般說來，機(jī)器剛起動(dòng)時(shí)，基線容易漂移，大概要半個(gè)小時(shí)的平衡時(shí)間，如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽，或在低波長下(220nm)平衡時(shí)間相對(duì)會(huì)比較長，但如果在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)基線漂移，則你要考慮下面的原因:①柱溫波動(dòng)；②流通池被污染或有氣體；③紫外燈能量不足；④流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成；⑤樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線；⑥檢測(cè)器沒有設(shè)定在最大吸收波長處；⑦流動(dòng)相的pH值沒有調(diào)節(jié)好。
解決方法：
①控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對(duì)著柱溫箱；②用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池(最好斷開柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)；③更換新的紫外燈；④檢查流動(dòng)相的組成，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑；⑤使用保護(hù)柱，如有必要，在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子；⑥將波長調(diào)整至最大吸收波長處；⑦加適量的酸或堿調(diào)至最佳pH值。
故障8：保留時(shí)間漂移
原因分析：
保留時(shí)間重現(xiàn)是液相性能好壞的一個(gè)重要標(biāo)志，同一種樣品，兩次的保留時(shí)間相差不要超過15s，超過了30s可看做保留時(shí)間漂移，就無法進(jìn)行定性，須要考慮以下原因：①溫控不當(dāng)；②流動(dòng)相比例變化；③色譜柱沒有平衡；④流速變化；⑤泵中有氣泡。
解決方法：
①調(diào)好柱溫，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對(duì)著柱溫箱；②檢查泵的比例閥是否有故障；③在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱；④重新設(shè)定流速；⑤從泵中除去氣泡。
故障9：靈敏度不夠
原因分析：
造成這種情況主要有以下原因:①樣品量不足；②樣品未從柱子中流出；③樣品與檢測(cè)器不匹配；④檢測(cè)器衰減太多；⑤檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大；⑥檢測(cè)器池窗污染；⑦檢測(cè)池中有氣泡；⑧記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng)；⑨流動(dòng)相流量不合適；⑩檢測(cè)器與記錄儀超出校準(zhǔn)曲線。
解決方法：
①增加樣品量；②可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子；③根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或該換檢測(cè)器；④調(diào)整檢測(cè)器衰減；⑤降低時(shí)間參數(shù)；⑥清洗檢測(cè)器池窗；⑦排出檢測(cè)池中的氣泡；⑧調(diào)整電壓范圍；⑨調(diào)整流動(dòng)相流量；⑩檢查記錄儀與檢測(cè)器，重作校準(zhǔn)曲線。
故障10：基線噪音
原因分析：
規(guī)則的基線噪音產(chǎn)生的原因主要有①在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣(尖銳峰)；②漏液；③流動(dòng)相混合不完全；④溫度影響(柱溫過高，檢測(cè)器為加熱)；⑤在同一條線上有其它電子設(shè)備(偶然噪聲)；⑥泵振動(dòng)。
不規(guī)則的基線噪音產(chǎn)生的原因主要有①漏液；②流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成；③流動(dòng)相個(gè)溶劑不相溶；④檢測(cè)器或記錄儀電子元件故障；⑤系統(tǒng)內(nèi)有氣泡；⑥檢測(cè)器內(nèi)有氣泡；⑦流通池污染(即使是極少的污染物也會(huì)產(chǎn)生噪音)；⑧檢測(cè)器燈能量不足；⑨色譜柱填料流失或阻塞；⑩流動(dòng)相混合不均勻或混合器不能正常工作。
解決方法：
規(guī)則的基線噪音解決方法:①流動(dòng)相脫氣，沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣；②檢查管路接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音，如有必要更換泵密封；③用手搖動(dòng)使混合均勻或使用粘度低的溶劑；④減小溫度差異，或增加熱交換器；⑤斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，并加以更正，采用精密級(jí)穩(wěn)壓電源；⑥在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器。
不規(guī)則的基線噪音解決方法:①檢查接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要更換密封，檢查流通池是否漏液；②檢查流動(dòng)相的組成；③選擇互溶的流動(dòng)相；④斷開檢測(cè)器和記錄儀的電源，檢查并更正；⑤用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng)；⑥清洗檢測(cè)器，在檢測(cè)器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器；⑦用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池；⑧更換檢測(cè)器燈；⑨更換色譜柱；⑩維修或更換混合器，在流動(dòng)相不走梯度時(shí)，建議不使用泵的混合裝置。
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