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液相色譜儀分析柱填料基質的種類與選擇法則

2019-01-03 10:01:44來源:admin

在現代高效液相色譜儀分析中,分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬,要做合適的選擇,首先必須對此有一定的認識和了解。液相色譜儀填料可以是陶瓷性質的無機物基質,也可以是有機聚合物基質。液相色譜儀填料中的有機物基質主要是硅膠和氧化鋁。無機物基質剛性大,在溶劑中不容易膨脹。液相色譜儀填料中有機聚合物基質主要有交聯苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯。有機聚合物基質剛性小、易壓縮,溶劑或溶質容易滲入有機基質中,導致填料顆粒膨脹,結果減少傳質,最終使柱效降低。那么由譜析儀器公司工程師簡單介紹液相色譜儀檢測中應用最為廣泛的三種基質填料的性質。
1)硅膠基質

硅膠基質是HPLC填料中最普遍的基質。除具有高強度外,還提供一個表面,可以通過成熟的硅烷化技術鍵合上各種配基,制成反相、離子交換、疏水作用、親水作用或分子排阻色譜用填料。硅膠基質填料適用于廣泛的極性和非極性溶劑。缺點是在堿性水溶性流動相中不穩定。通常,硅膠基質的填料推薦的常規分析pH范圍為2~8。
2)氧化鋁基質

氧化鋁基質具有與硅膠相同的良好物理性質,也能耐較大的pH范圍。它也是剛性的,不會在溶劑中收縮或膨脹。但與硅膠不同的是,氧化鋁鍵合相在水性流動相中不穩定。不過現在已經出現了在水相中穩定的氧化鋁鍵合相,并顯示出優秀的pH穩定性。
3)聚合物基質

聚合物基質以高交聯度的苯乙烯-二乙烯苯或聚甲基丙烯酸酯為基質的填料是用于普通壓力下的HPLC,它們的壓力限度比無機填料低。苯乙烯-二乙烯苯基質疏水性強。使用任何流動相,在整個pH范圍內穩定,可以用NaOH或強堿來清洗色譜柱。甲基丙烯酸酯基質本質上比苯乙烯-二乙烯苯疏水性更強,但它可以通過適當的功能基修飾變成親水性的。這種基質不如苯乙烯-二乙烯苯那樣耐酸堿,但也可以承受在pH13下反復沖洗。
所有聚合物基質在流動相發生變化時都會出現膨脹或收縮。用于HPLC的高交聯度聚合物填料,其膨脹和收縮要有限制。溶劑或小分子容易滲入聚合物基質中,因為小分子在聚合物基質中的傳質比在陶瓷性基質中慢,所以造成小分子在這種基質中柱效低。對于大分子像蛋白質或合成的高聚物,聚合物基質的效能比得上陶瓷性基質。因此,聚合物基質廣泛用于分離大分子物質。
液相色譜儀基質的選擇大致遵循以下法則,硅膠基質的填料被用于大部分的HPLC分析,尤其是小分子量的被分析物,聚合物填料用于大分子量的被分析物質,主要用來制成分子排阻和離子交換柱。

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